Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 6:04 min • July 8th, 2025
La pyrophosphokinase catalyse le transfert de diphosphate ou de pyrophosphate du précurseur nucléotidique, comme l’adénosine triphosphate, ATP, vers un substrat comme la guanosine diphosphate, GDP. Cela forme du tétraphosphate de guanosine - une molécule de signalisation importante.
Pour déterminer l’activité de la pyrophosphokinase, préparer un mélange réactionnel comprenant des GDPs et des ATP radiomarqués dans un tampon approprié complété par du chlorure de magnésium. Ajouter la quantité désirée de pyrophosphokinase au mélange réactionnel et incuber.
Au fil du temps, en présence d’ions magnésium, la pyrophosphokinase commence à transférer la fraction pyrophosphate radiomarquée de l’ATP au GDP, produisant ainsi du tétraphosphate de guanosine radioactif.
Maintenant, prenez une chromatographie sur couche mince ou TLC, plaque prérecouverte de polyéthylénimine-cellulose - une phase stationnaire à base de polymère cationique. Repérez les aliquotes des analytes du mélange réactionnel près de la base de la plaque CCM à différents moments pour arrêter la réaction et évaluer la progression.
Plongez la plaque dans une chambre en verre contenant du phosphate de potassium monobasique - un so
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques