Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:06 min • July 8th, 2025
Les fibres amyloïdes sont des agrégats de protéines mal repliées, qui présentent une hétérogénéité de taille. Ces fibres, étant résistantes aux détergents anioniques tels que les SDS, peuvent être analysées par électrophorèse bidimensionnelle sur gel d’agarose semi-dénaturant.
Pour commencer, prenez un gel d’agarose pré-assemblé, de la taille d’un grand pore, qui contient des FDS. La porosité élevée permet la séparation des fibres intactes pendant le passage. Superposez le gel avec un tampon contenant une FDS.
Chargez un lysat cellulaire contenant des fibres amyloïdes dans le gel. La présence de SDS et l’absence d’étape de chauffage de l’échantillon créent des conditions de semi-dénaturation où le détergent se lie à des amyloïdes très résistants, conférant une charge négative uniforme aux fibres intactes.
Faites fonctionner le gel dans la première dimension à la tension appropriée. Le champ électrique provoque la migration des amyloïdes chargées négativement vers l’anode chargée positivement.
Au cours de l’exécution, les fibres plus petites migrent rapidement par rapport aux plus grandes, formant un motif de bande en forme de tache indiquant une hétérogénéité de taille.
Une fois te
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