Électrophorèse sur gel de polyacrylamide natif bleu : une technique de séparation non dénaturante pour l’analyse de complexes de chaînes respiratoires mitochondriales intactes

Pour analyser les cinq complexes mitochondriaux de la chaîne respiratoire avec des sous-unités intactes, on obtient des complexes mitochondriaux solubilisés dans un détergent doux et non ionique. Mélanger avec un tampon contenant du Coomassie Blue-G, un colorant anionique.

Coomassie remplace le détergent et se lie de manière non spécifique aux complexes, conférant une charge négative et les colorant en bleu. De plus, Coomassie empêche les complexes de s’agréger et aide à préserver leur structure et leur fonction natives.

Dans un réservoir d’électrophorèse, assemblez une cassette de gel comprenant un gel de résolution de gradient avec une taille de pores décroissante sur la longueur, recouvert d’un gel d’empilage de la taille d’un grand pore. Remplissez les chambres d’anode et de cathode avec une anode réfrigérée et un tampon cathodique contenant de la Coomassie.

Chargez les puits avec un mélange de complexes protéiques liés à Coomassie. Amorcez l’électrophorèse.

Les complexes protéiques chargés négativement migrent du gel d’empilement dans le gel de résolution de gradient, vers l’anode chargée positivement. Alors que les petits complexes traversent rapidement les pores, les plus gr