L’électrophorèse alcaline sur gel unicellulaire : une technique sensible pour l’estimation quantitative des dommages à l’ADN dans les cellules cancéreuses individuelles après une chimiothérapie

Les agents chimiothérapeutiques induisent des cassures de l’ADN simple et double brin dans les cellules cancéreuses, provoquant des dommages à l’ADN et la mort cellulaire.

Pour quantifier les dommages à l’ADN, mélangez les cellules cancéreuses traitées par chimiothérapie avec de l’agarose fondue à faible point de fusion. Pipetez ce mélange sur des lames de verre pré-revêtues d’agarose. Laissez l’agarose fondue se solidifier, en intégrant les cellules dans la matrice de gel poreuse.

Traiter avec un tampon de lyse contenant de fortes concentrations de détergents et de sels. Les détergents solubilisent les membranes cellulaires et nucléaires. De plus, une teneur élevée en sel enlève les protéines d’histones de l’ADN, laissant de l’ADN super-enroulé attaché à la matrice nucléaire.

Incuber dans un tampon d’électrophorèse alcalin. L’environnement alcalin provoque le déroulement des superbobines d’ADN, exposant des cassures d’ADN simple brin et double brin.

Placez les lames dans un plateau de gel contenant un tampon d’électrophorèse. Amorcez l’électrophorèse.

Étant chargé négativement, l’ADN est attiré vers l’anode positive. Les fragments d’ADN endommagés migrent hors du noyau et voyagent