FDS non réductrice PAGE : Méthode d’analyse des complexes protéiques multimériques liés au disulfure

Les protéines multimères sont stabilisées par des liaisons disulfures intermoléculaires, covalentes entre leurs résidus de cystéine, ce qui est crucial pour maintenir leur intégrité structurelle et fonctionnelle.

Pour analyser de tels complexes par PAGE non réducteur, prenez la concentration souhaitée de protéines stabilisées au disulfure. Ajoutez un tampon d’échantillon non réducteur et chauffez l’échantillon.

Ce tampon contient du SDS, qui confère une charge négative globale aux protéines, et un colorant de suivi pour visualiser leur mouvement dans le gel. Le tampon est dépourvu de tout agent réducteur, ce qui permet aux liaisons disulfure de rester intactes, ce qui facilite le développement du complexe multimérique.

Chargez les différents complexes dans des puits de gel de polyacrylamide du pourcentage souhaité, pré-assemblés dans un appareil de gel. Ajoutez une échelle protéique de taille connue dans un autre puits. Immergez les puits dans une mémoire tampon de fonctionnement basée sur SDS et connectez l’appareil à une alimentation électrique.

Le courant électrique force les complexes protéiques chargés négativement à se déplacer à travers les pores du gel vers l’anode - la bor