Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 7:37 min • July 8th, 2025
Pour l’électrophorèse sur gel bidimensionnelle d’un mélange de protéines dérivé de tissu tumoral homogénéisé, traiter avec un tampon contenant des chaotropes, un détergent zwitterionique et un agent réducteur. Les chaotropes et les détergents dénaturent et solubilisent les protéines. Les agents réducteurs réduisent les liaisons disulfure des protéines, générant des groupes thiols libres et dépléchissant les protéines pour une résolution optimale des protéines.
Transvasez le mélange de protéines traitées dans un gradient de pH immobilisé, IPG, porte-bandelettes. Placez une bandelette IPG comprenant un gradient de pH linéaire dans la matrice de gel d’acrylamide. Ajoutez de l’huile minérale pour empêcher l’évaporation de la solution protéique. Transférez le support dans un système de mise au point isoélectrique, IEF. Laissez la solution protéique réhydrater la bandelette.
Effectuer l’IEF de première dimension. Le courant électrique fait migrer les protéines chargées à travers le gradient de pH vers des électrodes de charge opposée, s’immobilisant à leurs points isoélectriques respectifs - pH auquel les protéines ont une charge nette nulle.
Après l’IEF, traitez la bandelette IPG avec d
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