Électrophorèse sur gel zymographique : une technique électrophorétique pour détecter les métalloprotéinases matricielles en évaluant l’activité enzymatique
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 6:59 min • July 8th, 2025
La métalloprotéinase matricielle, ou MMP, une protéase multidomaine comprenant des domaines propeptides et catalytiques, est sécrétée sous forme d’enzyme inactive ou de zymogène par des cellules spécifiques. L’interaction entre l’ion zinc du domaine catalytique et le résidu cystéine du domaine propeptide maintient le MMP inactif.
Pour détecter les MMP dans le surnageant de culture cellulaire par électrophorèse sur gel de zymographie, remplissez le réservoir d’électrophorèse contenant la cassette de gel avec du dodécylsulfate de sodium ou un tampon de coulage contenant du SDS.
Chargez le surnageant de culture mélangé à un tampon de chargement, suivi d’étalons protéiques, dans des puits de gel de polyacrylamide, copolymérisé avec un substrat protéique spécifique du MMP.
Le SDS, un détergent chargé négativement, dans des conditions non réductrices, perturbe les interactions cystéine-zinc dans les MMP et dénature les protéines tout en leur conférant une charge négative.
Effectuez une électrophorèse. Le champ électrique fait migrer les protéines chargées négativement vers l’anode chargée positivement, provoquant une séparation des protéines en fonction de la taille.
Après l’électrophorè
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