Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:16 min • July 8th, 2025
Les phospholipides sont des lipides complexes contenant des groupes phosphate. Ces molécules sont hydrolysées par une enzyme appelée phospholipase.
Pour effectuer le dosage de l’activité de la phospholipase, prenez une émulsion de jaune d’œuf riche en phospholipides, qui agissent comme substrat pour l’enzyme. Ajoutez le jaune à une solution chaude d’agarose contenant du chlorure de sodium, ce qui améliore la stabilité des protéines du jaune d’œuf au cours des étapes suivantes.
Complétez le mélange avec du chlorure de calcium et un colorant fluorescent - rhodamine. Versez le mélange dans une plaque de Pétri. Lors de la solidification, les phospholipides vitellins restent répartis de manière homogène dans la matrice de gel d’agarose.
À l’aide d’un tube, créez des puits correctement espacés dans le gel. Ajouter des concentrations variables d’extrait de protéines brutes contenant de la phospholipase dans les puits. Incuber la plaque à température physiologique.
La phospholipase de l’extrait se diffuse radialement dans le gel. Les ions calcium contenus dans le gel se lient à la phospholipase, activant les enzymes. Cette enzyme clive les phospholipides, générant des acides gras libres. L
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques