Dosage de l’activité de la citrate synthase : un dosage colorimétrique pour mesurer l’activité de la citrate synthase mitochondriale dans l’homogénat du tissu de la drosophile

Dans les mitochondries, la citrate synthase, localisée dans la matrice de la membrane mitochondriale interne, est l’enzyme limitant le taux qui catalyse la réaction entre l’acétylcoenzyme A et l’acide oxaloacétique pour former le citrate, la première étape du cycle de l’acide citrique.

Pour analyser l’activité de la citrate synthase, transférez les thorax des mouches drosophiles adultes abondants en mitochondries dans un tube rempli d’un tampon d’extraction réfrigéré contenant de l’acide éthylènediaminetétraacétique, de l’EDTA et un détergent non ionique.

Homogénéiser les tissus du thorax sur de la glace pour prévenir la dénaturation des protéines induite par la chaleur. La force de cisaillement appliquée, en conjonction avec les détergents, lyse les tissus et libère des composants intracellulaires, y compris les mitochondries.

De plus, la rupture de la membrane mitochondriale interne entraîne la libération de protéines de la matrice mitochondriale, y compris la citrate synthase. L’EDTA se lie aux cations divalents et inhibe l’activité de la protéase, empêchant ainsi la dégradation des protéines.

Diluer l’homogénat à l’aide d’un tampon d’extraction et ajouter un volume approprié da