Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:04 min • July 8th, 2025
Commencer avec une monocouche de cellules épithéliales dans un milieu de culture approprié. Ces cellules expriment des intégrines - des récepteurs de surface couvrant la membrane. Le milieu de culture contient de la fibronectine sécrétée par les cellules épithéliales - une glycoprotéine.
Ajouter une suspension de Staphylococcus aureus - une bactérie pathogène à Gram positif - dans la plaque de culture. Ces bactéries contiennent des protéines de liaison à la fibronectine, ou FnBP, ancrées dans leur paroi cellulaire.
Incuber la plaque pour initier l’infection bactérienne, dans laquelle la fibronectine se lie à la FnBP de la bactérie et aux intégrines sur les cellules hôtes épithéliales. Cette interaction tripartite FnBP-fibronectine-intégrine médie l’internalisation bactérienne chez l’hôte.
Traitez les cellules avec de la lysostaphine - une enzyme endopeptidase - et incuber. La lysostaphine pénètre sélectivement dans les parois cellulaires des bactéries extracellulaires. Il clive les ponts pentaglycines dans les peptidoglycanes, les lysant ainsi tandis que les bactéries intracellulaires restent protégées de la lysostaphine.
Complétez la culture avec une enzyme protéolytique pour désa
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