Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
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Dans les tissus, le fer, un minéral essentiel crucial pour divers processus métaboliques, existe normalement séquestré dans les hémoprotéines et les protéines de fer non héminiques. Les hémoprotéines comprennent du fer ferreux ou héminique lié à des cycles de porphyrine, tandis que les protéines de fer non héminique n’ont pas la structure du cycle de porphyrine et comprennent principalement du fer ferrique ou non héminique.
Pour estimer la teneur en fer non héminique dans le tissu hépatique de souris, traiter un fragment de tissu hépatique de souris séché et récolté avec de faibles concentrations d’acide chlorhydrique et d’acide trichloracétique. Incuber à haute température pour digérer le tissu et faciliter la précipitation des protéines induites par l’acide.
En raison des faibles concentrations d’acide, le fer non héminique est libéré des protéines associées. Le fer héminique, lié au cycle porphyrine, reste intact.
Après refroidissement, transférez le volume souhaité de surnageant contenant du fer non héminique dans une plaque à plusieurs puits. Ajouter le chélateur de fer chromogène, le bathophénanthroline sulfonate, BPS, complété par de l’acide thioglycolique, un agent réducteu
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