Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:46 min • July 8th, 2025
Les ostéoclastes, macrophages multinucléés, facilitent la résorption osseuse - la dégradation du tissu osseux et la libération de minéraux osseux.
Pour quantifier la résorption des ostéoclastes in vitro, cultiver des cellules mononucléées du sang périphérique humain dans le facteur de stimulation des colonies de macrophages, M-CSF, contenant des milieux de différenciation en cellules progénitrices ostéoclastes et attachement. Récoltez les progéniteurs des ostéoclastes et centrifugez.
Pipetez la suspension cellulaire en suspension dans un milieu, complétée par du M-CSF et l’activateur du récepteur du ligand du facteur nucléaire kappa-B, RANKL, dans des puits à plaques multi-puits recouverts de phosphate de calcium, imitant le composant osseux inorganique. Le M-CSF et le RANKL provoquent la différenciation des progéniteurs ostéoclastes et leur fusion en ostéoclastes, activant la résorption.
Les ostéoclastes activés se fixent à l’enrobage de phosphate de calcium, réorganisant leur cytosquelette pour former une zone d’étanchéité riche en actine et développent des bordures ébouriffées, qui sécrètent des protons et des hydrolases acides. L’environnement acide qui en résulte dissout l’enr
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