Dosage de l’oxydation du substrat dans les cellules en culture : un dosage in vitro pour quantifier l’oxydation du substrat dans les cellules en mesurant les signaux radioactifs du CO₂ piégé

Dans les cellules métaboliquement actives, les substrats contenant du carbone sont oxydés par une série de réactions biochimiques pour générer de l’énergie et libérer du dioxyde de carbone comme sous-produit.

Pour déterminer le taux d’oxydation du substrat, commencez par une culture adhérente des cellules indifférenciées souhaitées. Complétez les cellules dans un milieu avec un substrat approprié contenant du carbone radioactif quatorze dans son épine dorsale, et incubez.

Les cellules consomment le substrat et l’oxydent pour libérer du dioxyde de carbone radiomarqué, qui se diffuse hors des cellules dans le milieu environnant.

Transférez ce milieu dans un ensemble de piégeage de gaz contenant de l’acide perchlorique pour éteindre la réaction. Ce tube contient un papier filtre imbibé d’hydroxyde de sodium installé à l’intérieur du capuchon du tube. Fermez le capuchon et incuberez.

Pendant l’incubation, le dioxyde de carbone, sous sa forme gazeuse, est libéré à l’intérieur du tube. L’hydroxyde de sodium absorbe le dioxyde de carbone radiomarqué, l’emprisonnant dans le papier filtre. Transférez ce papier filtre dans un flacon contenant un cocktail à scintillation et placez-le à l’inté