Essai de séparation de phase des protéines : une méthode optogénétique pour la séparation de phase des protéines de liaison à l’ARN mutant dans les motoneurones spinaux des larves de poisson-zèbre

Les protéines de liaison à l’ARN nucléaire, les RBP, sont des protéines multifonctionnelles composées de régions ordonnées avec une structure tridimensionnelle bien définie et de régions intrinsèquement désordonnées moins stables, les IDR.

Dans plusieurs maladies neurodégénératives, les mutations spécifiques à l’IDR font que les RBP se localisent mal dans le cytoplasme et s’engagent de manière aberrante dans des interactions faibles, formant des inclusions dynamiques sans membrane - un phénomène appelé séparation de phase. Finalement, ces inclusions se transforment en agrégats toxiques et insolubles, entraînant un dysfonctionnement neuronal et une dégénérescence.

Pour étudier la séparation de phase de la RBP in vivo à l’aide de l’optogénétique, il faut commencer par une larve de poisson-zèbre transgénique anesthésiée et déchoionnée, exprimant une RBP mutée par IDR fusionnée à un rapporteur fluorescent et à un domaine photorécepteur sensible à la lumière bleue, dans un tampon approprié.

Ensuite, montez la larve latéralement sur une goutte d’agarose fondue pour l’imagerie de la moelle épinière. Laisser l’agarose se solidifier, immobilisant la larve. À l’aide d’un microscope confocal,