Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:57 min • July 8th, 2025
Au cours de la régénération osseuse, les ostéoblastes - cellules formant des os - sont recrutés sur le site fracturé, où ils prolifèrent et sécrètent de l’ostéoïde - une matrice collagène. Après une période de maturation, les ostéoblastes minéralisent l’ostéoïde par dépôt régulé d’ions calcium et phosphate, initiant une nouvelle synthèse osseuse.
Pour quantifier le degré de minéralisation des ostéoblastes in vitro, obtenir une suspension primaire d’ostéoblastes dans un milieu approprié. Ensemencez la suspension dans une plaque multipuits contenant des disques de substitution de greffe osseuse poreuse et incubez.
Les disques servent d’échafaudage, permettant l’adhésion et la prolifération cellulaires.
Remplacez les milieux usagés par des milieux frais contenant des suppléments ostéogéniques. Incuber pendant une durée prolongée. Les suppléments ostéogéniques stimulent les ostéoblastes à produire et par la suite à minéraliser la matrice collagène.
Après fixation, colorer la matrice minéralisée avec la solution de rouge d’alizarine S, ARS. L’ARS, un colorant chargé négativement, se lie aux ions calcium chargés positivement dans la matrice, formant un complexe de couleur rouge. Enlevez
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