Test topique : Technique permettant d’évaluer le potentiel insecticide des antagonistes des récepteurs de la dopamine sur les moustiques femelles adultes par application topique

L’essai topique chez les moustiques dépend du dépôt direct d’un composé d’essai actif sur le thorax dorsal des moustiques adultes pour tester sa propriété insecticide.

Pour commencer, anesthésie les moustiques femelles adultes en les exposant au minimum thermique critique - une basse température qui cesse leur activité neuromusculaire.

Placez des moustiques femelles anesthésiés sous un microscope à dissection. Prenez une seringue en verre reliée à un micro-applicateur remplie du composé testé - un antagoniste des récepteurs de la dopamine - dans un solvant non polaire. Placez l’aiguille près du thorax et utilisez le micro-applicateur pour déposer soigneusement une goutte du composé d’essai sur la surface dorsale.

Après l’application, transférez les moustiques traités dans une chambre de croissance dans des conditions environnementales contrôlées pendant une période déterminée.

Le solvant non polaire dans la gouttelette solubilise les lipides dans la cuticule - une enveloppe externe - permettant au composé de pénétrer à l’intérieur. Le composé se diffuse à travers la couche épidermique inférieure et atteint les ganglions thoraciques - un groupe dense de cellules nerveuses connectées au système nerveux.

Lorsqu’il atteint les cellules nerveuses, le composé se lie à un site allostérique - un site de liaison supplémentaire pour les molécules régulatrices - sur le récepteur de la dopamine. La liaison allostérique entrave la cascade de signalisation en aval lors de la liaison à la dopamine - un neurotransmetteur contrôlant les processus biologiques critiques - conduisant à la mort.

Après la durée de l’expérience, notez le nombre de moustiques morts - individus traités sans aucun mouvement - afin d’évaluer le potentiel insecticide du composé d’essai.

Cultivez des moustiques femelles adultes de 3 à 5 jours dans une cage en plastique de 20 litres. Étiquetez les gobelets en papier de 9 onces avec le nom et la concentration du composé d’essai.

Ensuite, préparez une solution mère de 10 μg/μL du composé d’essai dans de l’acétone dans un flacon en verre de 20 millilitres. Ensuite, diluez en série la solution mère pour obtenir les concentrations de travail souhaitées.

Nettoyez une seringue en verre de 1 millilitre avec de l’acétone, puis remplissez-la avec la solution d’essai à la concentration appropriée. Fixez la seringue dans un micro-applicateur, ajusté pour délivrer un volume de 0,25 microlitre.

Ensuite, à l’aide d’un aspirateur, retirez dix moustiques femelles adultes de 3 à 5 jours de la cage et anesthésiez-les pendant 5 minutes à 4 degrés Celsius. Ensuite, transférez les moustiques dans une boîte de Pétri et placez le plat sur de la glace pendant 10 minutes.

Afin d’éviter d’endommager le moustique adulte, ce qui pourrait contribuer à la mortalité, assurez-vous qu’il n’est pas anesthésié dans le réfrigérateur pendant plus de 5 minutes, ou immobilisé sur de la glace pendant plus de 10 minutes, et minimisez la manipulation des moustiques. Si vous avez accès à une plaque froide et à un micromanipulateur avec une platine mobile, cela peut minimiser davantage la manipulation des moustiques.

Utilisez une pince à épiler fine pour retirer chaque moustique du plat. À l’aide du micro-applicateur à seringue, appliquez 0,25 microlitre de solution de test sur le thorax dorsal sous un microscope à dissection. Ensuite, transférez les moustiques dans un gobelet en papier étiqueté sur de la glace. Scellez la tasse avec un carré à mailles de 10 x 10 centimètres et un élastique. Ensuite, transférez-le dans la chambre de culture et enregistrez le nombre de moustiques morts.