$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Commencer l’essai d’alimentation des moustiques en préparant un repas de sang, en ajoutant la concentration souhaitée d’un composé d’essai actif dans du sang de lapin défibriné. Le repas de sang manque de fibrine, empêchant la coagulation du sang.
Chargez ce repas de sang dans l’orifice de distribution d’une unité d’alimentation à membrane. Fixez-le à une unité de chauffage, en maintenant le sang à une température optimale. Enduisez la membrane avec la solution d’acide lactique.
Placez cet appareil dans une cage contenant des moustiques femelles adultes pré-affamés pour augmenter les chances de se nourrir. Incuber dans l’obscurité. L’acide lactique attire les moustiques vers l’unité d’alimentation. Les conditions sombres les encouragent à se nourrir.
Transférez les moustiques nourris au sang dans une chambre de croissance. Après la digestion du repas de sang, le composé de test actif pénètre dans le corps du moustique, affectant divers organes et provoquant la mort de certains.
Comptez le nombre de moustiques morts et calculez le taux de mortalité. Évaluer l’effet de la substance d’essai sur le système reproducteur des moustiques survivants en introduisant un coquetier dans la chambre.
Les moustiques femelles utilisent les protéines du repas de sang et pondent des œufs, qui sont collectés à l’intérieur de la tasse. Comptez le nombre d’œufs, en estimant la diminution de la fécondité - capacité de ponte.
Une mortalité élevée et une faible fécondité correspondent à la capacité insecticide du composé.
Prélevez environ 150 moustiques femelles adultes de quatre à cinq jours à l’aide d’un aspirateur et transférez-les dans une cage séparée. Retirez la source de sucre 1 à 24 heures avant le test d’alimentation.
Préparez une solution mère de 80 millimolaires de la substance d’essai dans l’eau. Ensuite, diluez-le en série avec de l’eau pour obtenir des solutions mères de travail des concentrations souhaitées.
Pour obtenir les concentrations d’essai souhaitées, ajouter 40 microlitres de chaque dilution à 960 microlitres de sang de lapin défibriné dans un tube de 1,5 millilitre, et mélanger par pipetage. Placez un filtre à membrane sur une unité d’alimentation et scellez-le avec un anneau en caoutchouc.
Ensuite, à l’aide d’une pipette, transférez 1 millilitre de sang avec la solution de test à travers l’orifice de distribution situé à l’arrière de l’unité d’alimentation. Fixez l’unité d’alimentation à une unité de chauffage. Ensuite, tamponnez doucement la surface de la membrane avec une solution d’acide lactique à 10 % fraîchement préparée.
Placez l’unité d’alimentation dans la cage. Couvrez la cage avec un chiffon foncé et laissez les moustiques se nourrir pendant une heure. Une fois que les moustiques se sont nourris, placez la cage dans un réfrigérateur à 4 degrés Celsius pendant cinq minutes pour anesthésier les moustiques. Ensuite, comptez et notez le nombre total de moustiques dans la cage.
En examinant l’abdomen, comptez et notez le nombre total de moustiques femelles entièrement et partiellement nourris. Un minimum de 50 moustiques nourris au sang doit être obtenu par dose. Retirez tous les moustiques qui ne se sont pas nourris. Ensuite, transférez la cage dans une chambre de culture et utilisez une feuille de score pour enregistrer le nombre de moustiques morts aux moments appropriés.
Le 3e jour après l’alimentation sanguine, placez un coquetier dans la cage pendant 72 heures. À l’aide d’un microscope de dissection, vous devez compter le nombre total d’ovules produits par traitement.