Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:12 min • July 8th, 2025
L’élimination des protéines mal repliées dans la cellule est principalement régulée par le système cellulaire ubiquitine-protéasome, dans lequel la protéine est d’abord reconnue et marquée par l’ubiquitine, une petite protéine régulatrice, et trafiquée vers le protéasome, un complexe multiprotéique, pour l’hydrolyse et la clairance.
L’altération de l’activité du système ubiquitine-protéosome, un phénomène courant dans les maladies neurodégénératives, peut provoquer l’accumulation de protéines mal repliées dans les cellules, formant des agrégats de protéines insolubles avec des effets cytotoxiques.
Pour visualiser et quantifier l’agrégation de protéines in vitro, obtenir une suspension de cellules de mammifères transduites - exprimant une protéine mutante marquée par fluorescence qui adopte une conformation mal repliée avec des résidus hydrophobes exposés - dans un milieu approprié.
Pipette augmentant les concentrations d’un inhibiteur de protéasome dans les puits d’une plaque multipuits noire pour minimiser la fluorescence de fond pendant l’imagerie. Semez la suspension de cellules de mammifères dans les puits. Incuber pour permettre aux cellules d’adhérer au fond de la plaque et d
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