Dosage turbidimétrique du lysat d’amibocytes Limulus : une technique pour détecter et quantifier la contamination par les endotoxines dans les médicaments nanoformulés
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:38 min • July 8th, 2025
L’endotoxine, une toxine bactérienne à Gram négatif présente sur la membrane externe, est un lipopolysaccharide, LPS, composé principalement de lipides et de polysaccharides, y compris le lipide A et l’antigène O. Lorsqu’il est libéré pendant l’infection, il est reconnu par le système immunitaire, déclenchant des réponses inflammatoires à base de cytokines.
Pour estimer la contamination par des endotoxines dans une nanoformulation de médicament liposomal à l’aide du lysat d’amibocytes de Limulus, LAL, testez, préparez des tubes de réaction, l’un contenant le médicament et l’autre contenant le médicament enrichi d’une concentration connue d’endotoxines.
Ajoutez le réactif LAL contenant du lysat de protéines obtenu à partir de limules, de Limulus polyphemus, de cellules sanguines ou d’amibocytes. Le lysat comprend des protéases à sérine inactives - facteur B, facteur C, enzyme de coagulation - et une protéine de coagulation en gel, le coagulogène.
Vortex les tubes et chargez-les dans un turbidimètre pour mesurer la turbidité des solutions.
En présence de LPS contaminants liés à des médicaments liposomaux, le facteur C sensible au LPS est activé de manière autocatalytique, qui se cliv
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