Dosage du lysat d’amibocytes Gel-Caillot Limulus : une méthode de détection d’endotoxines bactériennes dans des formulations de nanoparticules

La membrane externe des bactéries à Gram négatif contient des endotoxines appelées lipopolysaccharides, ou LPS. Le LPS a une partie oligosaccharide hydrophile et une région lipidique A hydrophobe.

Une fois à l’intérieur de l’hôte, les protéines de liaison au LPS reconnaissent les endotoxines. Ces protéines se lient ensuite aux récepteurs des cellules immunitaires circulatoires. Cette liaison active les cellules immunitaires, qui libèrent des facteurs inflammatoires. La surproduction de ces facteurs exagère la réponse immunitaire, provoquant la mort cellulaire.

Pour détecter les endotoxines à l’aide du lysat d’amibocytes de Limulus, ou test LAL, prenez une formulation contenant des endotoxines liées à la surface lipophile des nanoparticules via leurs parties lipidiques A hydrophobes.

Ajoutez le réactif LAL dans le tube. Ce réactif est un lysat aqueux contenant des enzymes inactives et des protéines dérivées des amébocytes - cellules sanguines du crabe fer à cheval.

Incuber le tube pour faciliter la liaison des endotoxines à la proenzyme du facteur de coagulation C inactif dérivé du lysat, en l’activant de manière autocatalytique.

Le facteur C activé clive une autre proenzyme, le fac