Dosage de la liaison à l’annexine V : une technique basée sur la fluorescence pour identifier les érythrocytes apoptotiques via le marquage à la phosphatidylsérine

Dans certaines conditions pathologiques, les érythrocytes ou les globules rouges subissent un rétrécissement cellulaire accompagné d’une translocation du phospholipide membranaire - phosphatidylsérine - de l’intérieur au feuillet de la membrane externe, conduisant à la mort cellulaire programmée, l’éryptose, déclenchant la phagocytose cellulaire médiée par les macrophages.

Pour mesurer l’éryptose induite par les ionophores dans une population isolée d’érythrocytes humains via le test de liaison à l’annexine V, commencez par des érythrocytes en suspension dans un tampon sans glucose.

L’épuisement du glucose induit un stress cellulaire, activant la protéine kinase C cytosolique, qui active ensuite les canaux calciques et provoque un afflux d’ions calcium. De plus, les canaux potassiques sont activés, provoquant un efflux de potassium et un rétrécissement cellulaire.

Ensuite, ajoutez de l’ionophore de calcium qui forme un complexe stable avec des ions calcium extracellulaires. Le complexe facilite l’entrée cytosolique des ions calcium à travers la membrane cellulaire, augmentant encore la concentration de calcium intracellulaire. Ceci, à son tour, active le scramblase - un transporteu