Dosage in vitro de l’épuisement du glucose : une méthode basée sur la fluorescence pour quantifier l’absorption cellulaire du glucose par mesure extracellulaire de l’épuisement du glucose

Le glucose, une source d’énergie cellulaire primaire, pénètre dans les cellules via les protéines de transport du glucose de la membrane cellulaire. Le glucose est décomposé dans le cytoplasme cellulaire en pyruvate, via la voie glycolytique, générant de l’énergie par l’adénosine triphosphate, ou ATP, pour le métabolisme cellulaire.

Pour mesurer l’absorption intracellulaire du glucose, commencez par une culture adhérente de fibroblastes dans une plaque multi-puits. Remplacez le milieu par un milieu sans glucose et incuberez. Les cellules métabolisent le glucose disponible pour produire de l’énergie, atteignant un état de manque de glucose.

Remplacez le milieu d’un ensemble de puits par un milieu sans glucose contenant de l’insuline, un stimulateur d’absorption du glucose, et du désoxyglucose fluorescent, un analogue du glucose. Traitez un autre ensemble de puits avec un milieu sans glucose contenant du désoxyglucose fluorescent.

Pendant l’incubation, l’insuline stimule la translocation de transporteurs de glucose supplémentaires vers la membrane plasmique, facilitant ainsi l’augmentation de l’absorption de désoxyglucose fluorescent, en l’absence de glucose.

Le désoxyglucose est pho