Le test du filament d’actine glissant : un test de motilité in vitro pour étudier la translocation des filaments d’actine sur des myosines immobilisées

La myosine - une protéine motrice - interagit avec une autre protéine filamenteuse, l’actine, provoquant sa translocation.

Pour analyser le mouvement de glissement de l’actine, assemblez une chambre d’écoulement à base de lames de verre de sorte que la partie intérieure du dessus de la chambre soit recouverte de nitrocellulose. Font circuler les protéines de myosine à travers la chambre, qui s’immobilisent sur le revêtement de nitrocellulose.

Complétez la chambre avec des filaments d’actine non marqués - des actines noires - et ajoutez un tampon de motilité contenant des molécules d’adénosine triphosphate ou d’ATP.

Les filaments d’actine se lient aux myosines actives immobilisées ainsi qu’aux myosines inactives ou mortes. Les molécules d’ATP interagissent avec les myosines actives, conduisant à leur dissociation des actines noires tandis que les myosines inactives restent liées à l’actine.

Centrifugeuse pour granuler les myosines inactives attachées aux actines noires. Rincez abondamment avec un tampon pour éliminer la pastille de myosine inactive, les filaments d’actine libres et les ATP inutilisés. Flux d’actines marquées par fluorescence qui se lient aux myosines actives immobil