Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:39 min • July 8th, 2025
La myosine - une protéine motrice - a un domaine de tête globulaire qui interagit avec l’actine - une protéine filamenteuse. Cette interaction est essentielle pour la translocation de la myosine le long des filaments d’actine. Pour étudier cette liaison in vitro, effectuez un test de motilité inversée de la myosine sur de l’actine attachée en surface.
Pour commencer, assemblez une chambre de dosage en plaçant une lamelle recouverte de polyéthylène glycol biotinylé - PEG sur une lame de microscope de sorte que la surface revêtue soit tournée vers l’intérieur, créant ainsi le haut de la chambre.
Faites passer une solution contenant de l’avidine - une glycoprotéine - à travers la chambre. L’avidine se lie à la biotine avec une grande affinité, ce qui améliore l’adhésion de l’actine. Ensuite, faites couler des filaments d’actine marqués à la biotine avec un fluorophore rouge. Le ligand de biotine se lie à l’avidine, immobilisant les filaments à la surface de la lamelle.
Enfin, ajoutez des protéines de myosine 5A marquées par des protéines fluorescentes vertes dans un tampon contenant des molécules d’adénosine triphosphate, ou ATP. La myosine 5A à deux têtes, contenant une tête arrière
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