Essai de viabilité de la luciférase basé sur l’ATP : une méthode homogène pour évaluer le potentiel inhibiteur de croissance des agents d’essai sur les organoïdes tumoraux

L’adénosine triphosphate, ATP, la principale source d’énergie cellulaire, est vitale pour diverses fonctions cellulaires. En cas de stress, les niveaux d’ATP intracellulaires sont affectés négativement, ce qui fait de l’ATP un bon marqueur pour les cellules métaboliquement actives et viables.

Pour commencer, ensemencez la suspension des cellules tumorales dans une microplaque à paroi noire et à fond transparent pour une diffusion minimale de la lumière pendant la mesure de l’intensité lumineuse. La microplaque se compose d’un revêtement d’hydrogel qui empêche les cellules d’adhérer à la plaque, permettant l’interaction de cellule à cellule et l’auto-assemblage en organoïdes tumoraux - des cultures de tissus tridimensionnelles qui imitent le microenvironnement tumoral.

Ensuite, traitez avec un composé d’essai. Le composé testé interagit avec les cellules organoïdes et, en fonction de son potentiel inhibiteur de croissance, peut perturber les processus métaboliques producteurs d’énergie, entraînant une appauvrissement intracellulaire de l’ATP.

Après le traitement, ajoutez un réactif en une étape comprenant des détergents, des inhibiteurs de l’ATPase, l’enzyme luciférase, un substrat