Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:29 min • July 8th, 2025
Les cellules intestinales produisent des espèces réactives de l’oxygène (ROS). Des niveaux modérés de ROS maintiennent l’homéostasie cellulaire, tandis que des niveaux élevés de ROS peuvent provoquer la mort cellulaire.
Pour quantifier les niveaux de ROS in vitro, commencez par une culture d’organoïdes intestinaux 3D de souris. Ces organoïdes présentent une architecture intestin-épithélium avec des protubérances en forme de crypte abritant des cellules souches vertes exprimant la fluorescence. Ils contiennent également des cellules différenciées en forme de villosités à la périphérie, entourant la lumière centrale comprenant des cellules mortes et des débris. Toutes ces cellules produisent différents niveaux de ROS.
Maintenant, traitez les organoïdes dans les puits désignés avec des modulateurs ROS. De par leur nature, les modulateurs peuvent agir comme des inducteurs ou des inhibiteurs de ROS. Après l’incubation pendant la durée requise, retirez le milieu épuisé.
Ajoutez une enzyme protéolytique à la culture, perturbant l’architecture 3D des organoïdes et libérant différentes cellules en suspension. Ensuite, ajoutez une sonde fluorogénique sensible aux ROS et incubez.
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