Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 6:00 min • July 8th, 2025
La SUMOylation se produit en raison de la fixation de petits modificateurs de type ubiquitine, les SUMO, aux protéines du substrat.
La SUMOylation se produit lorsqu’un peptide SUMO mature est activé par une enzyme - E1. Lors de l’activation, le SUMO est transféré au site actif de l’enzyme conjugaison - E2 - attachant le SUMO au résidu de lysine de la protéine de substrat. Une autre ligase - E3 - améliore l’efficacité de cette interaction.
Pour effectuer un test de SUMOylation in vitro, commencez avec un tube contenant un mélange de la protéine du substrat - p53, d’enzymes et de peptides SUMO, et incubez pour induire la SUMOylation. Complétez le tube avec du dodécylsulfate de sodium - tampon contenant du SDS, mettant fin à la réaction. Chauffez l’échantillon pour dénaturer les protéines.
Chargez le mélange de protéines dans le puits d’un gel SDS-PAGE et effectuez une électrophorèse. Les protéines SUMOylées de poids moléculaire plus élevé se déplacent plus lentement que leurs variantes non SUMOylées, générant deux bandes distinctes.
Transférez le gel sur une membrane buvard présente sur un papier filtre humide dans un appareil à électrobuvard. Couvrir d’un papier filtre humide et tra
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