Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 2:59 min • July 8th, 2025
Les protéines nucléaires mal repliées sans structure tertiaire définie sont marquées avec de petits modificateurs de type ubiquitine, SUMO, et des molécules d’ubiquitine, qui facilitent leur dégradation par le système protéolytique, y compris le système ubiquitine-protéasome, l’UPS.
Dans plusieurs maladies neurodégénératives, le dysfonctionnement de l’UPS provoque l’accumulation et l’agrégation de protéines nucléaires mal repliées, entraînant la mort neuronale.
Pour étudier le taux de dégradation des protéines nucléaires mal repliées in vitro, traiter une culture de cellules de mammifères adhérentes avec un mélange comprenant une protéine mal repliée marquée par fluorescence codant pour de l’ADN plasmidique et un réactif de transfection.
Les cellules transfectées avec succès expriment des protéines à demi-vie courte mal repliées marquées par fluorescence et marquées avec un signal de localisation nucléaire. Lors du transport vers le noyau, ces protéines mal repliées subissent une SUMOylation et une ubiquitination et sont transférées à l’UPS pour la dégradation et l’élimination des protéines.
Après l’incubation, remplacer le milieu par un milieu à faible fluorescence contenant du cy
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