Le test de la luciférase : un test à haut débit pour mesurer les signaux luminescents à l’aide de biorapporteurs basés sur le système de nanoluciférase
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 2:36 min • July 8th, 2025
La luciférase est une enzyme qui oxyde son substrat pour former un produit bioluminescent.
Cette propriété de la luciférase est utile pour la conception d’un système rapporteur basé sur la nanoluciférase dans lequel la version divisée de l’enzyme est utilisée. Dans ce système, les fragments les plus petits et les plus grands possèdent une grande affinité de liaison les uns envers les autres et peuvent reconstituer l’enzyme fonctionnelle.
Pour utiliser le système basé sur la nanoluciférase pour détecter la protéine cible - domaine de liaison au récepteur de la glycoprotéine de pointe du SRAS-CoV-2 - commencez par une boîte de culture contenant des cellules adhérentes. Ces cellules contiennent un plasmide codant pour la protéine cible en conjonction avec une séquence spécifique pour le plus petit fragment de nanoluciférase modifiée.
Lors de l’expression, les cellules cultivées produisent des biorapporteurs - des protéines cibles recombinantes fusionnées avec le plus petit fragment de la luciférase. Traitez les cellules avec un tampon de lyse et incubez sous agitation. Les composants tampons lysent rapidement les cellules, libérant le contenu cellulaire, y compris les biorapporteurs,
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