Dosage cellulaire des anticorps neutralisants AAV : une technique colorimétrique pour détecter les anticorps neutralisants contre des virus adéno-associés spécifiques dans le sérum

Les virus adéno-associés recombinants, les rAAV, les virus à ADN monocaténaire génétiquement modifiés, non enveloppés, sont des porteurs de gènes thérapeutiques prometteurs.

Les rAAV se fixent aux récepteurs membranaires cellulaires cibles et subissent une endocytose médiée par la clathrine, facilitant la livraison nucléaire du génome du rAAV et l’expression génique thérapeutique. Cependant, les anticorps neutralisants du système immunitaire dirigés contre les rAAV se lient à l’épitope spécifique du rAAV, interférant avec la liaison à la membrane cellulaire, l’entrée cellulaire et le transfert de gènes.

Pour détecter les anticorps neutralisants contre des rAAV spécifiques dans le sérum de mouton, il faut d’abord obtenir des concentrations appropriées de sérum dilué. Ajouter des AAV recombinants exprimant le gène de la phosphatase alcaline placentaire humaine, hPLAP. Permettre aux anticorps neutralisants de se lier et de neutraliser les AAV.

Transférez ce mélange dans les puits d’une plaque multi-puits contenant une culture de cellules épithéliales humaines adhérentes. Lors de l’incubation, les AAV subissent une endocytose cellulaire. Les cellules transduites expriment le hPLAP, lié