Amplified luminescent Proximity Homogeneous Assay : Un test de proximité basé sur des billes pour cribler de petites molécules inhibant les interactions protéine-protéine

Dans les systèmes biologiques, la proximité d’une protéine avec son partenaire spécifique est un déterminant crucial de la réussite de l’interaction protéine-protéine. Avec de petites molécules inhibitrices présentes, ces protéines ne peuvent pas se rapprocher les unes des autres, perturbant leurs interactions.

Pour cribler des molécules inhibitrices capables de perturber les interactions entre deux protéines - un chaperon et un co-chaperon - prenez une plaque multi-puits contenant diverses petites molécules. Complétez les puits avec des perles de donneur ayant des co-chaperons attachés à leur surface. Ces billes contiennent des photosensibilisants pour le dosage de la chimiluminescence.

Ajoutez une boue de billes accepteuses conjuguées aux séquences peptidiques dérivées du chaperon qui se lient spécifiquement au co-chaperon. Les billes contiennent un colorant à base de thioxène et des fluorophores essentiels à la visualisation.

Dans les puits avec des molécules non inhibitrices, de fortes affinités entre les peptides de liaison au chaperons et les co-chaperons attirent les billes accepteurs et donneuses. Alors que les billes restent distantes lorsque des inhibiteurs sont présents.