Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 5:32 min • July 8th, 2025
Les cellules hôtes infectées par des agents pathogènes microbiens subissent l’apoptose, c’est-à-dire la mort cellulaire programmée. Au cours de l’apoptose, les DNases dégradent l’ADN chromosomique en petits fragments, entraînant la mort cellulaire.
Pour détecter l’apoptose à l’aide du test TUNEL, prélever une lame de verre avec une section de tissu cutané déparaffinisé et réhydraté infecté par un agent pathogène fongique.
Traitez le tissu avec la protéinase-K pour inactiver les DNases cellulaires, les empêchant ainsi de dégrader potentiellement l’ADN pendant l’analyse. Ajoutez du peroxyde d’hydrogène pour éteindre la réaction et lavez la lame pour éliminer la protéinase-K n’ayant pas réagi.
Ajoutez un tampon contenant des désoxy-uridine triphosphates marqués à la digoxigénine, ou dUTP. Complétez-le avec une désoxynucléotidyl transférase terminale, une enzyme TdT et incuber. Dans les cellules apoptotiques, l’enzyme TdT catalyse la fixation des dUTP marqués aux groupes 3′-hydroxyles exposés de l’ADN fragmenté.
Ensuite, ajoutez un anticorps anti-digoxigénine conjugué à un rapporteur de rhodamine et incubez-le dans l’obscurité pour faciliter la liaison des anticorps aux dUTP marqués à
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