Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 2:54 min • July 8th, 2025
La caspase-3 et la caspase-7 sont des protéases qui reconnaissent la séquence tétrapeptide DEVD dans les protéines cibles, les clivant à l’extrémité C du résidu d’acide aspartique. Ceux-ci jouent un rôle prépondérant dans la cascade de l’apoptose - mort cellulaire programmée.
Pour évaluer l’activité de la caspase-3/7 dans les cellules apoptotiques, commencez par un tube contenant un explant de peau d’orteil de grenouille infecté par des champignons induisant l’apoptose. Ajoutez un tampon approprié dans le tube et quelques billes métalliques.
Utilisez le battage des billes pour perturber les cellules de la peau et libérer le contenu cellulaire, y compris les protéines caspase-3/7. Centrifugez le tube, les débris cellulaires en granulation et les organites. Aspirez le surnageant riche en protéines du tube et pipetez dans les puits d’une plaque de dosage multipuits.
Complétez les puits avec le réactif de caspase luminogène. Ce réactif se compose d’un substrat proluminescent contenant le peptide DEVD dans une solution tamponnée contenant de l’ATP, des ions magnésium et l’enzyme luciférase.
Mélangez le contenu du puits et incuber. Pendant l’incubation, la caspase-3/7 clive le substrat p
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