Le test de phagocytose : une technique d’immunomarquage pour visualiser l’engloutissement des cellules apoptotiques dans les cellules embryonnaires de Drosophila melanogaster

Les macrophages sont des cellules immunitaires spécialisées qui éliminent les cellules subissant l’apoptose - la mort cellulaire programmée par phagocytose.

Pour évaluer l’engloutissement des cellules apoptotiques, commencez par une lame de verre contenant des cellules embryonnaires de drosophile fixes, y compris des corps apoptotiques engloutis par des hémocytes - macrophages invertébrés.

Tout d’abord, traitez les cellules avec un réactif bloquant qui bloque les sites non spécifiques. Ajoutez des anticorps primaires qui se lient aux récepteurs croquemorts - marqueurs phagocytaires des hémocytes. Lavez l’excès d’anticorps.

Ajoutez des anticorps secondaires marqués à la phosphatase alcaline qui se lient aux anticorps primaires. Maintenant, ajoutez une solution de substrat chromogène appropriée sur la lame et incuber. Pendant l’incubation, la phosphatase alcaline réagit avec le substrat chromogène pour produire des granules colorés en violet dans les hémocytes.

Ensuite, ajoutez un mélange réactionnel comprenant de la désoxynucléotidyltransférase terminale, de l’enzyme TdT et des nucléotides liés à la digoxigénine. Le TdT catalyse la fixation des nucléotides liés à la digoxigénine aux