Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 7:16 min • July 8th, 2025
Les ovocytes en prophase-I de la méiose sont transcriptionnellement actifs ; ils produisent des ARNm et les stockent sous une forme dormante. Au cours de la maturation, lorsque l’ovocyte entre en métaphase, les ARNm stockés sont traduits en protéines.
Pour étudier la traduction de l’ARNm, commencez par des ovocytes de souris arrêtés par la prophase I en suspension dans une goutte de milieu. Positionnez la pipette de maintien près d’un seul ovocyte pour la maintenir en position.
Prenez une pipette de micro-injection contenant un mélange rapporteur. Ce mélange contient deux types distincts d’ARNm, l’un codant pour la protéine fluorescente jaune, ou YFP - un rapporteur fusionné avec la région 3'-non traduite du gène cible - et un ARNm polyadénylé codant pour la protéine fluorescente rouge.
Injectez le mélange rapporteur dans l’ovocyte. Incuber les ovocytes micro-injectés dans un milieu de maturation complété par du cilostamide - un inhibiteur chimique qui maintient l’arrêt de la prophase I.
L’ovocyte traduit l’ARNm polyadénylé jusqu’à ce que l’intensité de la fluorescence rouge atteigne un plateau, tandis que les niveaux d’ARNm codant pour YFP sans queue de polyadénylation restent tel
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