Essai de fuite de fluorescence pour étudier l’interaction des peptides pénétrant dans les cellules avec la membrane

Les peptides pénétrant dans les cellules, les CPP, des peptides courts et chargés positivement, peuvent interagir avec les membranes cellulaires et les traverser, facilitant ainsi l’administration de cargaisons imperméables aux cellules.

Pour étudier le potentiel de perméabilisation membranaire d’un test de CPP in vitro à l’aide d’un mimétisme de membrane cellulaire, il faut commencer par une grande vésicule unilamellaire en suspension.

Les LUV comprennent une bicouche phospholipidique chargée d’une sonde fluorescente imperméable à la membrane et d’une paire de quencher correspondante. À l’intérieur des vésicules, le quencher interagit avec la sonde fluorescente en raison de leur proximité, provoquant une extinction de fluorescence.

Pipeter la suspension LUV dans une cuvette à fluorescence de quartz et diluer à l’aide d’un tampon. Ajoutez une barre magnétique. Transfert vers un spectrofluorimètre avec agitation magnétique pour éviter la sédimentation des LUV pendant le fonctionnement. Déterminez la fluorescence de fond pour éliminer toute fuite de LUV.

Ajoutez la concentration souhaitée de CPP à la suspension LUV à intervalles réguliers.

Sur la base de l’hydrophobicité et de la cha