Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 5:09 min • July 8th, 2025
Pour quantifier la teneur en protéines solubles dans un tissu végétal, dans un tube, commencez par une quantité appropriée de tissu végétal moulu et lyophilisé.
Ajouter de l’hydroxyde de sodium, un alcali, dans le tube et sonifier. L’environnement alcalin avec les forces mécaniques perturbe les cellules, libérant du contenu intracellulaire, y compris des macromolécules - protéines solubles et glucides. Incuber à des températures plus élevées.
En présence de chaleur, les alcalis provoquent l’hydrolyse des protéines, formant des peptides plus petits et augmentant la solubilité des protéines. De plus, les glucides se dégradent.
Centrifugez le mélange. Prélever le surnageant contenant des protéines solubilisées. Ajouter de l’acide chlorhydrique pour neutraliser le pH.
Traitez l’échantillon avec de l’acide trichloracétique, TCA. Le TCA perturbe la coquille d’hydratation entourant les protéines, entraînant l’agrégation et la précipitation des protéines.
Centrifugez et retirez le surnageant contenant du TCA. Lavez la pastille de protéine avec de l’acétone glacée pour éliminer tout résidu de TCA, qui pourrait interférer avec l’estimation des protéines solubles.
Faites sécher l’acétone à l’
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