Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:34 min • July 8th, 2025
Toxoplasma gondii - un protozoaire unicellulaire - est un parasite anaérobie obligatoire, se reproduisant uniquement à l’intérieur des cellules hôtes.
Pour quantifier la croissance intracellulaire du parasite à l’aide d’un test basé sur la luciférase, prenez une suspension de cellules parasitaires exprimant la luciférase - une enzyme qui produit de la luminescence lors de sa réaction avec son substrat. Ajoutez la suspension à une culture de fibroblastes de prépuce humain et incubez pendant une durée adéquate.
Le parasite se lie aux récepteurs de la cellule hôte et est internalisé via un processus endocytaire, formant une vacuole parasitophore. La structure fournit une niche pour que le parasite se reproduise.
Après l’infection, aspirer le milieu, en éliminant les parasites non internalisés. Ajoutez un tampon de lyse contenant un détergent et de la luciférine - un substrat pour la luciférase. Le détergent contenu dans le tampon crée des pores dans la membrane cellulaire et lyse complètement les cellules, ce qui entraîne la libération de luciférase.
L’enzyme libérée oxyde les molécules de luciférine, émettant de la lumière. Mesurez l’intensité de la luminescence pour déterminer l’act
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