Technique d’enregistrement basée sur l’électroencéphalographie pour enregistrer l’activité épileptiforme

Les neurotransmetteurs chimiques libérés par un neurone affectent les cellules voisines, permettant aux impulsions électriques de passer entre les neurones. L’excès de neurotransmetteurs excitateurs provoque des perturbations de l’activité électrique du cerveau, entraînant des crises récurrentes - une excitation neuronale répétitive anormale et une mort neuronale progressive, conduisant à l’épilepsie.

Pour enregistrer l’activité épileptiforme ex vivo, commencez par prendre un insert de membrane contenant des tranches organotypiques dérivées du cerveau du rat, du cortex rhinal et de l’hippocampe, qui décrivent l’évolution des événements épileptiques. Chaque tranche a un gyrus denté défini - région DG et cornu ammonis - région CA, composé de neurones pyramidaux multipolaires serrés.

Cultivez les tranches pendant une durée prolongée, simulant des conditions de stress induites par la privation sérique progressive qui conduisent à la mort neuronale, ressemblant à des conditions épileptiques in vivo. Placez une tranche organotypique dans la chambre d’enregistrement d’un appareil d’électrophysiologie (EEG), l’hippocampe touchant le fond de la chambre.

La chambre d’enregistrement est préremplie d’un milieu contenant de la L-glutamine – un précurseur de neurotransmetteur – qui initie l’excitation neuronale. Placez l’électrode réceptrice attachée à un capillaire en verre contenant du liquide céphalo-rachidien artificiel dans une région CA3 riche en neurones pyramidaux.

Enregistrez l’activité électrique. Générez un électrographe, qui montre brièvement les événements ictaux - des zones avec des pics soudains - correspondant au début de l’activité épileptiforme.

Un nombre accru d’événements ictaux, qui durent pendant des périodes prolongées, indique des crises récurrentes.

Préparez l’installation d’électrophysiologie en circuit fermé. Vérifiez que le débit de la chambre de type interface est réglé à deux millilitres par minute et ouvrez la vanne de la carbox. Vérifiez le niveau d’eau dans le système et placez un morceau de papier filtre dans la chambre d’enregistrement de l’interface pour évacuer tout excès de fluide.

Placez un morceau de papier de nettoyage de l’objectif sous le cadre pour fournir du fluide à la tranche et allumez le régulateur de température, les amplificateurs et les micromanipulateurs.

À l’aide d’une seringue, chargez l’électrode de verre avec du liquide céphalo-rachidien artificiel fraîchement préparé. Placez l’électrode en verre dans l’électrode réceptrice et attendez que la température dans la chambre d’interface se stabilise à 37 degrés Celsius.

En travaillant dans une enceinte de biosécurité, placez l’insert dans une plaque de 60 millimètres avec une goutte de fluide. Utilisez une lame tranchante pour couper une tranche de l’insert et placez la tranche dans la chambre d’interface avec l’hippocampe en bas à droite. Ensuite, placez l’électrode réceptrice dans la couche de cellule pyramidale CA3.

Lancez le protocole d’acquisition continue et enregistrez la tranche pendant 30 minutes.