Essai de mort neuronale pour évaluer la mort cellulaire dans un modèle d’épilepsie ex vivo

L’épilepsie – des crises spontanées et récurrentes dans le cerveau – entraîne la mort des cellules neuronales.

Pour étudier la mort neuronale dans un modèle d’épilepsie ex vivo, commencez par prélever une tranche organotypique du cortex rhinal-hippocampe – préparée à partir du cerveau d’un bébé rat – dans un milieu approprié.

La tranche organotypique est constituée du cortex rhinal et de l’hippocampe. En cas de privation sérique progressive, ces régions décrivent des événements épileptiques évolutifs, conduisant à la mort neuronale induite par les crises.

Ajoutez la quantité requise d’iodure de propidium, PI – un colorant fluorescent – à la culture et incuber. À travers la membrane cellulaire endommagée, l’IP pénètre dans les neurones morts et se lie à l’ADN ; les neurones vivants, avec une membrane intacte, ne sont pas capables d’absorber l’IP.

Placez la tranche organotypique sur une lame de microscope pour l’immunomarquage. Ajouter la solution bloquant la perméabilisation et incuber.

Les molécules détergentes présentes dans la solution solubilisent les lipides membranaires, créant des pores dans la membrane des cellules intactes, les rendant perméables pour les étapes ultérieures