Un essai pour étudier l’effet d’un composé testé contre la neurotoxicité médiée par PolyQ chez les vers

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Techniques biologiques

0 vues • 4:06 min • July 8th, 2025

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Certaines maladies neurodégénératives héréditaires impliquent des protéines avec une longue chaîne de résidus de glutamine, appelée polyglutamine, polyQ, tractus. Ces protéines structurellement instables et sujettes aux mauvais repliements finissent par s’accumuler pour former des agrégats toxiques, affectant négativement la fonction neuronale et la survie.

Pour évaluer le potentiel protecteur d’un composé testé sur la survie neuronale contre la neurotoxicité médiée par polyQ, commencez par une suspension de larves transgéniques de Caenorhabditis elegans exprimant des protéines fluorescentes et polyQ dans des neurones chimiosensoriels appariés.

Transférer dans les puits d’une plaque multi-puits contenant le milieu et la source de nourriture bactérienne. Ajoutez la substance d’essai à un ensemble de puits. Scellez la plaque, en minimisant la déshydratation et la contamination du fluide. Couver.

Au cours du développement du ver, les protéines polyQ forment des agrégats dans les neurones ASH, entraînant une neurotoxicité associée à l’agrégation et affectant la survie neuronale.

S’il est présent, le composé testé pénètre dans les neurones et, en fonction de sa capacité neuroprotectrice, peut supprimer l’agrégation de la protéine polyQ, atténuant ainsi la neurotoxicité associée et améliorant la survie neuronale.

Récupérez les vers adultes et centrifugez. Remettre les vers en suspension dans un tampon approprié et les transférer sur un tampon d’agarose avec un produit chimique approprié pour l’immobilisation.

À l’aide d’un microscope à fluorescence, visualisez les neurones ASH pour détecter les protéines fluorescentes, un indicateur de la survie des neurones.

Une fluorescence plus élevée dans le traitement que dans les puits témoins suggère une augmentation du taux de survie neuronale, indiquant le potentiel neuroprotecteur du composé testé dans la suppression de l’agrégation polyQ et de la neurotoxicité associée.

Pour préparer les nématodes à l’essai de neurotoxicité polyQ, transférez 300 à 500 larves synchronisées L1 de nématodes HA759 dans chaque puits d’une plaque de 48 puits avec 500 microlitres de milieu S contenant la souche OP50 d’E. coli et 5 milligrammes par millilitre d’astragalane. Après avoir scellé les plaques, incuber, récolter et remettre en suspension les nématodes dans le tampon M9, comme démontré.

Préparez maintenant un tampon d’agarose en ajoutant 2 grammes d’agarose à 100 millilitres de tampon M9, et chauffez la solution au micro-ondes jusqu’à ce qu’elle soit presque à ébullition. Versez 0,5 millilitre d’agarose fondue au centre d’une lame de verre de microscopie de 1 millimètre d’épaisseur, placée entre deux morceaux de plaques de verre de 2 millimètres d’épaisseur, en recouvrant d’une autre lame verticalement. Retirez délicatement la lame supérieure une fois que l’agarose a refroidi et s’est solidifiée.

Commencer l’essai de survie neuronale ASH en ajoutant une goutte de 20 millimolaires d’azoture de sodium sur le tampon d’agarose, puis en transférant 15 à 20 nématodes HA759 dans la goutte pour les immobiliser. Placez doucement une lamelle sur les nématodes.

Maintenant, conservez la lame sous un microscope à fluorescence équipé d’un appareil photo numérique. Sélectionnez une lentille d’objectif 40x et un filtre FITC pour détecter les neurones ASH positifs à la GFP dans la région de la tête des nématodes.

Sélectionnez plus de 50 nématodes dans chaque groupe au hasard, pour compter le nombre de nématodes avec des neurones ASH bilatéraux marqués à la GFP dans leur région de la tête, puis calculez le taux de survie des neurones ASH.

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Dernière mise à jour : 1 août 2026