Dosage des plaies pour évaluer la capacité migratoire des myoblastes murins en co-culture

En réponse à une blessure, les cellules sécrétoires produisent des molécules de signalisation paracrine pour activer les myoblastes, des cellules musculaires indifférenciées. Les myoblastes activés migrent vers le site de la plaie, où ils prolifèrent, provoquant la cicatrisation de la plaie.

Pour évaluer la capacité migratoire des myoblastes in vitro, on prend une plaque multipuits contenant une monocouche confluente de myoblastes murins. À l’aide d’une pointe de pipette, grattez la monocouche pour créer une tache linéaire et sans cellule à l’intérieur du puits, qui simule le site de la plaie.

Complétez soigneusement le puits avec le milieu de croissance sans perturber le patch de la plaie.

Prenez un insert membraneux contenant une culture adhérente de cellules de la crête neurale, ou NCC (cellules sécrétoires), dans un milieu approprié. Placez l’insert à l’intérieur du puits, de sorte que les NCC à la base soient près du patch de la plaie. Incuber la co-culture pendant la durée souhaitée.

Au cours de l’incubation, les NCC libèrent des molécules de signalisation qui se lient aux récepteurs spécifiques des myoblastes, initiant une cascade de signalisation. Cette signalisation facili