Dosage immuno-enzymatique pour vérifier les conjugués anticorps-antigène couplés chimiquement

Pour provoquer une réponse immunitaire, les antigènes se lient aux anticorps spécifiques des récepteurs endocytaires présents à la surface des cellules dendritiques, ou DC – les cellules présentatrices d’antigènes – qui aident à l’absorption des antigènes.

La formation d’un complexe anticorps-antigène est une étape cruciale et peut être accomplie in vitro en couplant chimiquement l’antigène à un anticorps monoclonal ciblant les DC.

Pour vérifier l’efficacité du processus de conjugaison, commencez par une plaque ELISA pré-enduite des anticorps capturés. Traitez la plaque avec une solution bloquante pour éviter la liaison non spécifique des antigènes à la surface revêtue.

Ajoutez des conjugués anticorps-antigène chimiquement réticulés dans la plaque et incuber. L’épitope spécifique de l’antigène interagit avec le paratope de l’anticorps capturé, formant un complexe anticorps-antigène-anticorps.

Ensuite, superposez la plaque avec un troisième ensemble d’anticorps liés à une enzyme. Ces anticorps se lient spécifiquement aux anticorps primaires présents dans le conjugué, ce qui permet sa détection.

Ajoutez un tampon contenant le substrat chromogène pour visualiser les conjugués. L’enzym