Dosage des comètes pour la détection des dommages à l’ADN dans les cellules

L’exposition à des agents nocifs induit des cassures simple et double brin de l’ADN cellulaire, ce qui entraîne des dommages à l’ADN.

Pour détecter les dommages à l’ADN, commencez par une suspension unicellulaire de cellules traitées chimiquement dans de l’agarose liquéfiée à bas point de fusion. Chargez la suspension sur une lame de verre et laissez l’agarose se solidifier, ce qui permet l’immobilisation des cellules dans la matrice de gel poreuse.

Traitez les cellules avec un tampon de lyse. Les détergents contenus dans le tampon solubilisent les membranes cellulaires et nucléaires, tandis que les sels éliminent les histones de l’ADN, formant un corps nucléoïde contenant de l’ADN attaché à la matrice nucléaire.

Incuber les lames dans un tampon d’électrophorèse alcalin. Cela provoque le déroulement de l’ADN et la génération de fragments simple brin. Placez la lame dans un appareil d’électrophorèse et connectez-la à l’alimentation électrique. Cela permet la migration de l’ADN chargé négativement vers l’anode positive.

L’ADN non endommagé reste restreint dans le corps nucléoïde. En revanche, les fragments d’ADN plus petits et endommagés commencent à se déplacer vers l’anode. Ce mouv