Dosage de l’absorption des acides aminés radiomarqués pour quantifier l’absorption cellulaire des acides aminés

Les transporteurs d’acides aminés sont des protéines liées à la membrane qui interviennent dans le transfert d’acides aminés à travers les membranes cellulaires, régulant les processus cellulaires vitaux.

Pour étudier l’absorption des acides aminés in vitro, prenez une culture de cellules stromales dérivées de la moelle osseuse de souris. Aspirez le milieu de croissance. Ajoutez un tampon préchauffé complété par de la glutamine – un acide aminé – marqué avec de l’hydrogène radioactif. Incuber pendant la durée requise.

Le tampon préchauffé fournit la température physiologique et un pH approprié requis pour l’absorption cellulaire de la glutamine. Les transporteurs de glutamine se composent de domaines de transport - responsables de la translocation du substrat via le co-transport couplé aux ions sodium - et de domaines d’échafaudage ancrés dans une membrane.

Le domaine de transport se lie à la glutamine radiomarquée avec les ions sodium du tampon. Lors de la liaison, il libère les molécules dans le cytoplasme. Simultanément, le domaine de transport déplace les ions sodium intracellulaires et les acides aminés neutres à l’extérieur de la cellule, ce qui entraîne l’homéostasie cellula