Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 2:29 min • July 8th, 2025
Les niveaux cellulaires de pyruvate – un intermédiaire clé dans les voies biochimiques productrices d’énergie – peuvent être estimés à l’aide de tests colorimétriques basés sur des enzymes.
Pour déterminer les niveaux de pyruvate dans les cellules de Caenorhabditis elegans – un nématode non parasite – prélevez une fraction cellulaire préparée à partir de vers adultes contenant du pyruvate. Traitez la solution, en éliminant les protéines cellulaires, et prélevez la fraction cellulaire clarifiée - l’échantillon de test - contenant du pyruvate. L’absence de protéines cellulaires assure une détermination précise des niveaux de pyruvate.
Commencez par ajouter un réactif de travail contenant les enzymes pyruvate oxydase et peroxydase de raifort, ainsi qu’un colorant chromogène. Incuber le mélange à l’obscurité pendant une durée adéquate.
Pendant l’incubation, la pyruvate oxydase réagit avec le pyruvate – son substrat – en générant du peroxyde d’hydrogène comme sous-produit. L’absence de lumière empêche la décomposition spontanée du peroxyde d’hydrogène.
La peroxydase de raifort catalyse la réaction entre le peroxyde d’hydrogène et le colorant chromogène, produisant un produit coloré. L’i
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques