Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:00 min • July 8th, 2025
La glycogène synthase – une enzyme cruciale dans la synthèse du glycogène – clive l’uridine diphosphate glucose, ou UDP-glucose – un sucre nucléotidique – en UDP et en résidus glycosyliques et ajoute le monomère de glucose libéré à la chaîne glycogénique en croissance.
Pour estimer l’activité de la glycogène synthase, commencez par prendre un mélange réactionnel contenant du glycogène, de l’UDP-glucose, de l’ATP, du phosphoénolpyruvate et du nicotinamide adénine dinucléotide, ou NADH, dans un tube. Ajoutez l’enzyme kinase nucléoside diphosphate, ou NDP, et un cocktail d’enzymes pyruvate kinase et lactate déshydrogénase. Mélangez le contenu et incuberez.
Ajouter l’échantillon contenant de la glycogène synthase dans le tube pour initier la réaction enzymatique.
La glycogène synthase agit sur l’UDP-glucose, générant l’UDP et un résidu glycosyle. L’enzyme absorbe le monomère de glucose libre et l’incorpore dans la chaîne glycogène du mélange réactionnel. En présence d’ATP, la kinase NDP du mélange réactionnel phosphoryle l’UDP inutilisé, le convertissant en UTP et générant de l’ADP.
L’enzyme pyruvate kinase agit sur l’ADP et ajoute un phosphate donné par le phosphoénolpyruvate du mélan
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