Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:02 min • July 8th, 2025
Les interactions protéine-protéine sont cruciales pour les fonctions cellulaires vitales.
Pour étudier les interactions entre les protéines transmembranaires – protéines membranaires qui couvrent la bicouche lipidique de la membrane cellulaire, commençons par les puits d’une plaque multipuits contenant une culture de cellules de mammifères adhérente.
Ensuite, ajoutez une solution contenant un agent de transfection approprié et une paire de plasmides d’expression.
L’un des plasmides d’expression code pour une protéine transmembranaire d’intérêt fusionnée au petit fragment non fonctionnel de l’enzyme luciférase ; l’autre plasmide code pour une seconde protéine transmembranaire d’intérêt fusionnée au grand fragment non fonctionnel de l’enzyme luciférase.
Incuber l’assiette. L’agent de transfection facilite l’absorption cellulaire des plasmides d’expression.
Les cellules transfectées avec succès expriment les protéines transmembranaires. L’interaction entre les protéines transmembranaires exprimées rapproche les petits et les grands fragments faisant face au cytoplasme, ce qui les amène à se lier et à former l’enzyme luciférase active.
Remplacez le milieu dans les puits par un milieu s
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