Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:34 min • July 8th, 2025
La PCR numérique par gouttelettes détecte les mutations indelles, c’est-à-dire l’insertion ou la suppression aléatoire de nucléotides dans l’ADN. Ceci est réalisé en divisant l’échantillon en minuscules gouttelettes et en amplifiant indépendamment l’ADN dans chaque gouttelette.
Pour effectuer la ddPCR, prélevez un échantillon d’ADN contenant des variations de type sauvage et mutantes du gène cible. Chargez le mélange d’échantillons et l’huile dans des compartiments distincts de la chambre du générateur de gouttelettes contenant le canal microfluidique.
L’échantillon et l’huile s’écoulent rapidement à travers les canaux étroits, s’émulsionnent à la jonction et sont divisés en plusieurs gouttelettes, chacune contenant quelques molécules d’ADN.
Maintenant, prenez une plaque PCR avec le tampon contenant des amorces avant et arrière, des dNTP, de l’ADN polymérase thermostable et deux sondes marquées avec des fluorophores et des molécules d’extinction différents. Chaque sonde est spécifique à un type particulier d’allèle – de type sauvage ou mutant.
Transférez les gouttelettes sur la plaque PCR. Placez la plaque dans un thermocycleur et lancez la réaction. Lors de la dénaturation, les br
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