Techniques de PCR

Cette vidéo démontre le rôle de la réaction en chaîne par polymérase numérique dans l’identification de la mutation indel dans un échantillon d’ADN. La haute précision et la sensibilité de la ddPCR permettent une détection précise et cohérente des mutations rares présentes dans un échantillon, même à de faibles niveaux. Il permet d’identifier et de quantifier les mutations indel dans différentes régions du génome, fournissant ainsi des informations précieuses sur les mécanismes de mutation et...

Cette vidéo illustre la réaction en chaîne de la polymérase de gradient pour l’optimisation de la température de recuit des amorces, qui définit la température de recuit de gradient le long des puits. L’effet des différentes températures de recuit est déterminé par le rendement des produits amplifiés qui permet d’optimiser les conditions de réaction.

Dans cette vidéo, nous faisons la démonstration de la technique de PCR numérique duplex (ddPCR), une modification de la technique PCR traditionnelle qui est utile pour détecter simultanément deux marqueurs génétiques différents. Une seule réaction de PCR est divisée en gouttelettes émulsionnées de la taille d’un nanolitre qui sont amplifiées indépendamment, et la détection de signaux d’amplification de fluorescence de couleurs différentes à partir de la fraction de gouttelettes est utilisée...

Cette vidéo présente une méthode quantitative de détection de l’infection virale à l’aide de la PCR par transcription inverse en temps réel. L’étape de transcription inverse convertit l’ARN en ADNc, qui est ensuite amplifié via des cycles de PCR. La présence d’ARN viral dans l’échantillon est confirmée par l’analyse des courbes d’amplification et de dissociation de l’ADN obtenues par PCR.

Cette vidéo décrit la réaction en chaîne par polymérase bloquante de type sauvage, ou WTB-PCR, qui détecte les mutations somatiques. La technique basée sur la PCR utilise un acide nucléique verrouillé, ou LNA, un oligonucléotide qui se lie à son allèle complémentaire de type sauvage et bloque son élongation. Le blocage permet sélectivement l’amplification d’allèles mutants de bas niveau sur leurs variantes de type sauvage dans l’échantillon.

Dans cette vidéo, nous discutons de la réaction en chaîne quantitative par polymérase, qPCR, pour dénombrer les bactériophages T7 par quantification de l’ADN. Le colorant fluorescent dans le mélange PCR se lie aux brins d’ADN nouvellement synthétisés et émet une fluorescence, qui est mesurée.

Cette vidéo décrit la technique d’amplification de l’ADN simple brin à l’aide de microsphères polymères recouvertes d’oligonucléotides dans une réaction monotube. Ce processus produit de l’ADN simple brin pur, qui peut être utilisé pour le séquençage de l’ADN et l’analyse des microréseaux.

Cette vidéo décrit la réaction en chaîne par polymérase imbriquée, une technique qui consiste en deux processus d’amplification PCR séquentielle à l’aide de deux jeux d’amorces. Le premier ensemble d’amorces est destiné à recuire les séquences en amont du deuxième ensemble, ce qui entraîne une amplification sélective de séquences génétiques spécifiques. Cette PCR est plus sensible et plus spécifique qu’une PCR normale et est largement utilisée comme technique de détection pour diverses maladies.

Dans cette vidéo, nous décrivons une technique de PCR de fusion à haute résolution pour déterminer le polymorphisme de longueur de fragments d’ADN de différentes longueurs de séquence, sur la base de l’analyse de la température de fusion.

Cette vidéo présente la technique d’amplification en chaîne par polymérase multiplex pour la quantification simultanée de régions d’ADN méthylées dans différentes populations de globules blancs en tant que biomarqueur précoce pour le diagnostic clinique et le pronostic.

Cette vidéo démontre l’utilité de la PCR numérique dans un format de puce dans un tube pour la détection de variations nucléotidiques uniques dans des échantillons d’ADN. Une seule réaction PCR est répartie dans des chambres qui agissent comme des réactions PCR indépendantes, et la détection des signaux de fluorescence des cibles amplifiées dans les chambres est utilisée pour calculer la fréquence de l’allèle variant dans l’échantillon.

Cette vidéo présente la PCR numérique sur puce - une variante de la technique de PCR numérique qui est utile pour détecter des variantes de transcrit rares. La réaction PCR est répartie dans les chambres d’une puce nanofluidique, chacune d’entre elles agissant comme une réaction indépendante. La détection de signaux de fluorescence à partir des chambres avec des cibles amplifiées confirme la présence de variants de transcrits rares dans l’échantillon.